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英亞體育轉基因動物平臺旨在為科研提供基因工程動物模型制備與動物品系資源保種等技術服務及培訓,為學校及校外科研單位提供技術支撐。同時也會根據學校不同實驗室的特殊需要,研發新的技術與方法用于動物疾病模型的建立。在做好服務的同時,本平臺將關注生物醫藥與實驗動物前沿技術,不斷學習與研究新的技術與方法,提高試驗成功率,優化平臺管理與服務水平。

下面列出試運行期間技術服務內容,后面將根據實際需求情況作進一步擴充和調整。歡迎有需求的課題組聯系我們開展相關試驗。

聯系人:俞慧清;郵箱:yuhq@@amazoonicorescuecenter.com;電話:20684557

一、平臺主要儀器

儀器名稱

品牌

型號

存放地點

顯微注射儀1

Olympus + eppendorf

IX83

14號樓4

顯微注射儀2

Olympus + eppendorf

IX73

14號樓4

顯微注射儀3

Olympus

IX73

14號樓4

拉針儀

Sutter

P-1000

14號樓4

鍛針儀

Narigihe

MF900

14號樓4

磨針儀

Narigihe

EG401

14號樓4

到置熒光顯微鏡

LEICA

DMI8

14號樓4

體式顯微鏡

NIKON

SMZ1270

14號樓45

體式顯微鏡

LEICA

SAPO

14號樓45

融合儀

BTX

ECM2001

14號樓4

電轉儀

BEX

CUY21ERITII

14號樓4

凝膠成像

Azure

C150

14號樓4

化學發光成像儀

GE

 

  

AI680

14號樓4

PCR

Life

Proflex

14號樓4

分光光度計

Thermo Fisher

NanodropONEC


  

14號樓4

離心機

EPPENDORF

5810R

14號樓4

酶標儀

TECAN

Spark

14號樓4

 

 


















二、平臺技術服務及技術培訓

1.小鼠種質保存與復蘇、生物凈化

序號

服務項目

成功標準

1

小鼠生物凈化

±8

2

小鼠擴繁

≥30

3

小鼠胚胎凍存

±300

4

小鼠胚胎復蘇

±8

5

小鼠精子凍存

±20

6

小鼠精子復蘇

±8





1.1小鼠凈化說明

1)   常規體外受精(IVF)凈化,請提供公鼠≥1只,平臺提供B6ICR等品系母鼠用于取卵。公鼠須健康狀況良好,有交配生育經驗,3-6月齡為宜。

2)   自然配種凈化,請提供公鼠≥2只,母鼠≥5只。公鼠3-6月齡,母鼠3-4周齡為宜。

3)   對出生幼鼠數量有額外要求的,請務必標注清楚或提前告知。

1.2小鼠擴繁說明

1)   IVF擴繁,請提供公鼠≥1只,平臺提供B6ICR等品系母鼠用于取卵。公鼠須健康狀況良好,有交配生育經驗,年齡3-6月齡為宜。

2)   若用以擴繁的公鼠只剩1只,建議同時凍精。

3)   對幼鼠數量有額外要求的,請務必標注清楚或提前告知。

1.3 小鼠胚胎凍存注意事項

1)   小鼠胚胎凍存有兩種獲取受精卵的方式:自然交配和IVF取卵,凍存約300枚胚胎。

2)   自然交配取卵:要求每品系公鼠數量≥4只;母鼠≥15只。該方法耗時,同時產生較多的飼養費用,但復蘇效率高。如需獲得純合子或多基因后代,公母鼠皆為純合子或多基因,公鼠3-6月齡,母鼠3-4周齡為宜。

3)   IVF取卵:要求每品系公鼠≥2只,與野生型B6或其他品系母鼠卵子體外受精,B6母鼠由平臺提供; 若需獲得純合子或多基因后代,需提供公鼠≥2只,母鼠≥15只,公母鼠皆為純合子或多基因,公鼠3-6月齡,母鼠3-4周齡為宜。

1.4 小鼠精子凍存注意事項

提供公鼠≥2只,公鼠3-6月齡為宜,有交配生育經驗(大于6月齡的老齡公鼠可以嘗試做)。每凍一次犧牲2只公鼠,共存20桿麥桿。精子凍存效果按1-5分評價,低于3分會再復凍一次。

1.5 小鼠胚胎復蘇注意事項

1)   申請凍胚復蘇,復蘇完成后是否補充凍存量,請自行決定且及時告知平臺。

2)   外來胚胎復蘇,需提供保存在液氮中的胚胎,并提供復蘇方法及復蘇液。

1.6 小鼠精子復蘇注意事項

1)   申請凍精復蘇,復蘇完成后是否補充凍存量,請自行決定且及時告知平臺。

2)   外來精子復蘇,一般需提供保存在液氮中的精子,并提供復蘇方法。

2.小鼠不孕不育輔助生殖

序號

問題

方法

適用年齡

1

非性成熟小鼠雄鼠死亡

圓精注射

22日齡-8

2

弱精,少精,死精

單精注射

8周及以上

3

性成熟雄鼠不育或突然死亡

體外受精

8周及以上

4

雌鼠不孕或突然死亡

卵巢移植

10日齡及以上

3.顯微注射相關

序號

服務項目

備注

1

顯微液射儀使用

操作人員需有相關經驗

2

卵細胞注射

自備注射用核酸或蛋白

3

受精卵注射

自備注射用核酸或蛋白,培養至囊胚

4

注射后胚胎移植

自行進行顯微注射,平臺協助進行受體移植

5

顯微注射+胚胎移植

自備核酸或蛋白,注射后移植,獲得后代

6

囊胚注射+胚胎移植

自備ES細胞,注射后移植,獲得后代

7

單精注射+胚胎移植

針對不育小鼠或個性化需求






 

說明:

3.1申請獨立使用操作顯微注射儀者需有熟練的胚胎操作經驗、熟悉儀器使用相關流程及注意事項。

3.2申請胚胎移植服務,請在移植小鼠出生后取回小鼠。

3.3申請受精卵顯微注射+胚胎移植,平臺提供其它所需實驗材料及相關服務,待小鼠出生后取回。

3.4申請囊胚注射,請準備好注射用細胞,移植小鼠出生后取回。

3.5申請單精注射,請準備好供精小鼠,移植小鼠出生后取回。

 

4.基因工程小鼠制備

序呈

服務項目

特征

1

基因敲除(KO

片段直接敲除

2

條件性基因敲除(cKO

Cre等小鼠交配后,能實現特異組織或者全身性敲除

3

多用途條件基因KO-first敲除

Cre等工具鼠交配可得表達報告基因以及基因敲除小鼠

4

基因定位敲入(KI

敲入基因表達,內源性基因不

表達/敲入基因表達,內源性基因不表達/基因部分替換

5

隨機插入Random   transgenesis

外源基因隨機插入表達

6 

定位過表達(Site specific KI)

外源基因精確整合到小鼠

Rosa26/H11基因內

 

說明:

4.1基因工程小鼠制備因為所需修飾基因的不同,每個試驗難度各異,請務必在試驗前充分溝通,以達到最好的效果。

4.2 實驗結束后提供基因修飾小鼠2只或以上,并附實驗報告及后期繁育建議。

 


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